محیط کشت میکروبی Orange Serum Agar که به نام محیط کشت آگار و سرم پرتقال نیز شناخته میشود، برای جداسازی کشت و شمارش میکروارگانیسمهای فاسدکننده مقاوم به اسید در آبمیوه و کنسانترههای آبمیوه، بهویژه مرکبات استفاده میشود. این محصول در تولید آبمیوه و جهت تأیید حضور میکروارگانیسم های مقاوم به اسید در مواد غذایی بسته بندی شده کاربرد دارد.
طریقه عمل محیط کشت آگار
پپتون کازئین الزامات کلی رشد برای ترکیبات کربنی و نیتروژنی را تحت پوشش قرار داده، عصاره مخمر ویتامین های ب کمپلکس و عناصر کمیاب را فراهم می آورد. گلوکز نیز منبع کربن و انرژی است. علاوه بر مقدار پایین اسیدیته محیط کشت، تشکیل اسید اضافی حاصل از گلوکز به نفع رشد مخمرها، کپک ها، گونه های لاکتوباسیلوس و لوکونوستوک است. این عوامل فساد مواد غذایی با افزودن عصاره پرتقال تحریک می شوند.
ظاهر محیط کشت شفاف و مایل به زرد است. مقدار اسیدیته در محدوده 5.7-5.3 قرار دارد. محیط کشت را می توان بر حسب معیار مورد نظر تنظیم یا تکمیل کرد.
کاربرد های محیط کشت آگار
محیط کشت را می توان با قراردادن در حمام آب داغ چنان که در استاندارد ISO 11133 مشخص شده ذوب کرد. توجه کنید که از گرمایش بیش از حد محیط کشت اجتناب شود. به محض آن که ذوب شد، آن را از حمام آب جوش بردارید. محیط کشت مذاب را به یک حمام آب با کنترل ترموستاتیک انتقال دهید. محدوده دمایی 50-47 درجه سانتی گراد حفظ شود. توصیه می شود در اسرع وقت محیط کشت مورد استفاده قرار گیرد. برای شمارش باکتری به روش پور پلیت، آگار در دمای 95 درجه سانتی گراد در یک حمام آب مایع شود (لوله آزمایش 10 دقیقه، بطری های 200 میلی لیتری 30 دقیقه) و سپس تا محدوده دمایی 47-44 درجه سانتی گراد در یک حمام ثانویه آب سرد شود.
فرایند کامل مایع سازی، سرمایش و مشروط کردن دمایی در محدوده دمایی 47-44 درجه سانتی گراد نباید بیش از 4 ساعت به طول بیانجامد. آگار مایع روی نمونه های موجود در پتری دیش ها ریخته شده و با چرخاندن آن به اطراف اختلاط صورت می گیرد. دیش ها را می توان به صورت هوازی یا تحت شرایط کمهوادوست با افزایش میزان کربن دی اکسید با استفاده از Anaerocult یا Anaerocult C mini به مدت 5-2 روز در محدوده دمایی 30-25 درجه سانتی گراد انکوبه کرد. رشد قارچ غالباً تحت شرایط میکرو آئروفیلیک مهار شده و همزمان رشد باکتری اسید لاکتیک میکروآئروفیل تقویت می شود. به سبب آن که آگار سرم پرتقال انتخاب پذیری ضعیفی دارد، کلنی های بالغ باید مورد شناسایی قرار گیرند. محیط غذایی انتخابی محیط کشت یست گلوکز کلرامفنیکل آگار برای قارچ و MRS آگار برای لاکتوباسیلوس مناسب جهت شناسایی بیشتر هستند. کاندیدا آیدنت آگار و سرئوس آیدنت آگار به صورت محیط مغذی انتخابی کروموژنیک در دسترس هستند. لوکونوستوک گرم مثبت بوده و معمولاً به صورت جفت یا زنجیره تحت میکروسکوپ ظاهر می شود. آن ها غیر متحرک، ایندولیل و کاتالاز منفی بوده و از گلوکز اسید تشکیل می دهند.
نگهداری و ماندگاری
اگر محصول به صورت عمودی و دور از نور نگه داشته شود، تا تاریخ انقضا برای نمونه برداری قابل استفاده است و به طور صحیح در محدوده دمایی 25-2 درجه سانتی گراد مهر و موم شده باشد.مراحل آزمایش چنان که روی CoA توصیف شده می توان تا تاریخ انقضای چاپ شده روی لیبل آغاز کرد.
دفع
لطفا مقررات مربوطه برای دفع محیط کشت استفاده شده (مانند اتوکلاو به مدت 20 دقیقه در دمای 121 درجه سانتی گراد، ضد عفونی،سوزاندن) را در نظر بگیرید.
بیشتر بخوانید:
- راهنمای انتخاب و خرید بشر پلاستیکی
- کشور چین و ویژگیهایش
- معرفی کشور ترکیه و فرهنگش
- معرفی کشور عراق تاریخ و فرهنگ آن
- معرفی کشور امارات متحده عربی
- معرفی کشور هند و فرهنگ آن
اصل روش
عصاره پرتقال، اسیدیته محیط را به نفع بازیابی میکروارگانیسم های مقاوم به اسید کاهش می دهد. عصاره مخمر منبع ویتامین ها وبه ویژه ویتامین های گروه B است. هضم آنزیمی کازئین، آمینو اسید ها، کربن، نیتروژن و مواد معدنی را برای رشد ارگانیسم ها فراهم می آورد. گلوکز یک کربوهیدرات دارای قابلیت تخمیر است. پتاسیم فسفات یک عامل بافری کننده است. آگار هامل جامد کننده است.
نحوه آماده سازی محیط کشت آگار
42 گرم از پودر را در یک لیتر آب مقطر یا دیونیزه معلق نمایید. همه را با هم مخلوط کنید.
حرارت دهی صورت می گیرد تا بجوشد، به طور مکرر تکان داده می شود تا به طور کامل حل شود. در دمای 115 درجه سانتی گراد به مدت 15 دقیقه در اتوکلاو استریل می شود.